Come monitorare la crescita cellulare

Scienziati di routine controllano la crescita cellulare . Può essere una parte della manutenzione periodica cellula , o come parte di un esperimento. Per esempio, un esperimento potrebbe essere impostato per confrontare l' impatto di tre diversi farmaci sulla crescita delle cellule . In questo caso , quattro fiaschi di cellule alla stessa concentrazione sono impostati ; uno senza alcun farmaco come un controllo , e uno per ognuno dei tre farmaci . Cellule vengono rimosse dalle beute a intervalli regolari, ad esempio ogni giorno , conteggiati e registrati . Il numero di cellule vengono riportati su un grafico contro il tempo , l'impatto dei farmaci sulla crescita cellulare può essere paragonata al controllo. Cose che ti serviranno
Le cellule in sospensione
Provette
Pipets
crescita medio
emacitometro
Cover slittamento
mano tally contatore
Lens Carta in Blu tripano
Microscopio
Mostra più istruzioni
Cells
1

cellule agitare delicatamente per ottenere una sospensione omogenea . Rimuovere un volume di cellule, come 1,0 millilitri ( ml ) , con una pipetta e trasferire in una provetta . Diluire le cellule per dare 100.000 a 500.000 cellule per ml - questo dovrebbe fornire circa 100 cellule necessarie per la significatività statistica quando il conteggio
2

Diluire le cellule , se necessario , con l'aggiunta di 9,0 ml di terreno al . 1,0 ml di cellule . Mescolare e registrare la diluizione . Se le cellule sono ancora troppo concentrate , rimuovere 1,0 ml di cellule diluite in una nuova provetta , aggiungere 9,0 ml di terreno , mixare e registrare la diluizione . Cellule di mammifero solito crescono nell'intervallo 100.000 a 5.000.000 per ml , quindi 0 a 2 diluizioni devono essere sufficienti .
3

Mescolare le cellule dalla diluizione finale . Rimuovere un piccolo volume, ad esempio 0,1 ml , e posto in una nuova provetta . Aggiungere un uguale volume di trypan blu , mix e registrare la diluizione . Le cellule morte occupano trypan blu e apparirà blu sotto il microscopio .
Conteggio
4

lucidare la emacitometro e coprioggetto con carta per lenti e luogo coprioggetto sulla griglia hemocytameter . Aggiungere una goccia di cellule diluiti alla forma a V vicino alla griglia . Le cellule si muovono sotto il vetrino per azione capillare .
5

Posizionare il vetrino sul microscopio , si concentrano sulla griglia e utilizzare riscontro mano contatore per contare le vitali, non blu, cellule . Le cellule non devono sovrapporsi , se troppo denso , eseguire un'altra diluizione. Se le cellule sono troppo diluite , preparare un campione più concentrato.
6

Rimuovere il emacitometro , pulito , ricaricare , e contare di nuovo . Contare ogni campione di cellule tre volte .
Calcolo
7

Calcolare il numero di cellule per ml . La griglia emocitometro è diviso in 9 grandi piazze , ognuna con un volume di 0,1 ml .
8

dividere il numero di cellule contate per il numero di grandi quadrati utilizzati ( nove se si utilizza l'intera griglia ) , e moltiplicare per 10.000 per ottenere cellule per ml . Moltiplicare per il fattore di diluizione ( s) per la concentrazione finale .
9

Registrare la data , il campione , il conteggio delle cellule , fattori di diluizione e il numero finale di cellule per ml . Preparare un grafico del numero di cellule rilevata in tempo a mostrare la crescita cellulare .

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