Il protocollo LacZ

LacZ rappresenta un gene batterico che produce l'enzima beta - galattosidasi , che scinde il lattosio in glucosio e galattosio . L'enzima scinde anche il composto X -gal , che produce un colore blu che biologi molecolari usano come marcatore o giornalista per monitorare la presenza del gene LacZ in cellule . Trasfezione

scienziati collegano il gene LacZ con un gene di interesse , come l'insulina , con un frammento di DNA chiamato plasmide . Usano metodi di transfezione chimici o elettrici per ottenere il plasmide in cellule . Le cellule sono saggiati per l'espressione di LacZ beta - galattosidasi , che segnerà anche la presenza del gene dell'insulina .
Fissazione

Dopo la trasfezione , le cellule sono coltivate su una piastra di Petri di plastica . Per il saggio , il mezzo di crescita viene rimosso e le cellule vengono lavate con tampone fosfato ( PBS ) . Una soluzione di fissaggio fresca di formaldeide , metanolo e glutaraldeide viene utilizzata per fissare le cellule per due minuti . Il fissativo viene rimosso e le cellule sono lavate nuovamente con PBS .
X - gal

Una soluzione colorante fresca che contiene X -gal , ferri - potassio cianuro di potassio e ferro- cianuro viene aggiunto alle cellule durante la notte . Le cellule vengono lavate nuovamente con PBS , e se il gene LacZ è presente, la beta -galattosidasi saranno spaccati la X -gal e le cellule saranno blu .

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