Electrocompetent Protocollo cellulare

I biologi molecolari di routine inserire frammenti di DNA - plasmidi - contenenti geni di interesse in batteri . Questo è un modo semplice per replicare e produrre più del gene e /o generare il prodotto del gene, che può essere del tipo insulina . Elettroporazione

elettroporazione è un metodo per ottenere il plasmide in batteri . Batteri e DNA sono mescolati in un tubo ed esposti ad un campo elettrico prodotto da una macchina elettroporazione . Il campo elettrico punzoni piccoli fori nei batteri , consentendo il DNA nelle cellule. I batteri che occupano il DNA più efficiente sono cellule electrocompetent .
Metodo

electrocompetent batteri come E. coli possono essere prodotte attraverso una serie di centrifugazioni ripetute, prima di rimuovere il loro mezzo di crescita e sostituirlo con acqua ultra - pura , e infine a sostituire l'acqua con glicerolo . Nelle fasi finali i batteri sono risospesi in un piccolo volume di glicerolo , diviso in tubi, congelati in azoto liquido e conservati a lungo termine in un grado centigrado -80 ( -112 gradi Fahrenheit ) congelatore .

Considerazioni

Questo protocollo di solito è fatto con grandi volumi che richiedono grandi fiaschi , agitatori e centrifughe . E 'fondamentale che le fasi dalla raccolta alla conservazione tutti essere eseguiti a temperature ghiacciate . Acqua ultra - pura deve essere utilizzato .

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